引物二聚体(pcr引物二聚体特别亮)
基本原理
聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是一种体外特定核酸序列扩增技术。模拟DNA的天然复制过程,由变性复性延伸三个基本反应步骤构成:根据靶序列DNA片段两端的核苷酸序列,合成两个不同的寡聚核苷酸引物,它们分别与DNA的两条链互补配对。将适量的寡聚核苷酸引物与4种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)。DNA聚合酶及含有靶序列片段的模板DNA分子混合,经过高温变性(使DNA双链解开)、低温复性(使引物与模板附着)和中温延伸(合成新的DNA片段)三个阶段的一次循环,DNA的量即可以增加1倍,则30次循环后,DNA的量增加230倍。
典型的PCR反应体系和PCR的三个阶段
典型的PCR反应体系构成:
DNA模板
反应缓冲液
两个合成的DNA引物:dNTP、MgCl2(分别为上游引物和下游引物)
耐热TaqDNA聚合酶等
PCR的三个阶段如下:
模板DNA的变性:模板DNA经加热至94左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;
模板DNA与引物的复性:温度降至55左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
引物的延伸:DNA模板引物结合物在TaqDNA聚合酶作用下,以4种dNTP为反应原料,靶DNA序列为模板,按碱基配对与半保留复制原则,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性复性延伸,就可获得更多的半保留复制链,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
实验用品
1。材料
枯草芽孢杆菌BacillussubtilisAS1。398基因组DNA溶液
2。试剂
2Taq酶PCR反应混合液(含TaqDNA聚合酶、P...
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